Clathrin Light Chain B/CLTB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404228

Panoramica

CLTB codifica la catena leggera B della clatrina, una subunità regolatoria del triskelion di clatrina che modula l’assemblaggio del rivestimento, la dinamica del reticolo e le interazioni con gli adattatori durante l’endocitosi mediata da clatrina. Grazie al suo ruolo nella formazione di vescicole alla membrana plasmatica e nella rete trans-Golgi, CLTB supporta l’internalizzazione dei recettori, il ciclo delle vescicole sinaptiche e lo smistamento delle proteine di membrana che influenzano la segnalazione a valle e l’assorbimento di nutrienti. Il traffico dipendente da CLTB si interfaccia con il riciclo endosomale e l’instradamento lisosomiale, modellando il tempo di permanenza dei recettori e la sensibilità delle vie di segnalazione. La disfunzione del rivestimento di clatrina e del flusso endocitico è spesso associata ad alterazioni della trasduzione del segnale e della proteostasi, fenotipi studiati di frequente in biologia del cancro e in modelli di neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Clathrin Light Chain B/CLTB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CLTB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CLTB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CLTB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Clathrin Light Chain B/CLTB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CLTB per lo studio della segnalazione di Clathrin Light Chain B/CLTB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CLTB critici per la funzione di Clathrin Light Chain B/CLTB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CLTB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CLTB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Clathrin Light Chain B/CLTB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Clathrin Light Chain B/CLTB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CLTB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CLTB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.