Clathrin Light Chain A/CLTA Plasmide Double Nickase (h): sc-403962-NIC

CLTA codifica per la catena leggera A della clatrina, un componente fondamentale delle vescicole rivestite di clatrina che, durante l’endocitosi, modula l’assemblaggio e la dinamica del reticolo di clatrina insieme alla catena pesante. CLTA supporta l’internalizzazione mediata da recettori, il riciclo delle vescicole sinaptiche e il traffico tra la membrana plasmatica, gli endosomi e la rete trans-Golgi, collegandosi così a vie che regolano la composizione di membrana e l’attenuazione della segnalazione. Attraverso il suo ruolo nello smistamento del carico e nel routing endosomiale, CLTA influenza il turnover di recettori quali quelli dei fattori di crescita e i recettori immunitari, plasmando la segnalazione a valle e l’omeostasi cellulare. La disregolazione del traffico mediato da clatrina è stata associata a processi neurodegenerativi, ad alterazioni della segnalazione metabolica e a cambiamenti rilevanti per il cancro nel riciclo dei recettori e nell’assorbimento di nutrienti, rendendo CLTA un nodo utile per studi meccanicistici della biologia delle vescicole.

Clathrin Light Chain A/CLTA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLTA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLTA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLTA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLTA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.