Plasmide Double Nickase (h) Clathrin Light Chain A/CLTA: sc-403962-NIC

CLTA code la chaîne légère A de la clathrine, un composant central des vésicules à manteau de clathrine qui module l’assemblage et la dynamique du treillis de clathrine avec la chaîne lourde de clathrine lors de l’endocytose. CLTA soutient l’internalisation médiée par les récepteurs, le recyclage des vésicules synaptiques et le trafic entre la membrane plasmique, les endosomes et le réseau trans-Golgi, ce qui l’associe aux voies contrôlant la composition membranaire et l’atténuation des signaux. Par son rôle dans le tri du cargo et l’acheminement endosomal, CLTA influence le renouvellement de récepteurs tels que les récepteurs de facteurs de croissance et les récepteurs immunitaires, façonnant ainsi la signalisation en aval et l’homéostasie cellulaire. La dysrégulation du trafic médié par la clathrine a été associée à des processus neurodégénératifs, à une altération de la signalisation métabolique et à des modifications pertinentes pour le cancer du recyclage des récepteurs et de l’absorption des nutriments, faisant de CLTA un nœud utile pour les études mécanistiques de la biologie des vésicules.

Clathrin Light Chain A/CLTA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLTA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLTA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLTA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLTA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.