Clathrin Light Chain A/CLTA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403962-ACT

CLTA codifica la catena leggera A della clatrina, una subunità accessoria fondamentale del rivestimento di clatrina che regola l’assemblaggio e la dinamica dei triskelion di clatrina durante l’endocitosi mediata da clatrina. Modulando la stabilità del rivestimento e le interazioni con le proteine adattatrici, CLTA supporta l’internalizzazione dei recettori, il riciclo delle vescicole sinaptiche e il traffico tra la membrana plasmatica e i compartimenti endosomiali. Questi processi influenzano il turnover del segnale dei recettori per fattori di crescita e dei trasportatori di nutrienti, collegando la funzione di CLTA a vie che governano l’omeostasi di membrana e lo smistamento intracellulare. Alterazioni del traffico endocitico e perturbazioni della rete di clatrina sono spesso studiate in ambiti come la neurobiologia, la biologia delle infezioni e la segnalazione recettoriale oncogenica, in cui cambiamenti nell’assorbimento o nel riciclo possono rimodellare il comportamento cellulare.

Clathrin Light Chain A/CLTA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLTA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Clathrin Light Chain A/CLTA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLTA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLTA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Clathrin Light Chain A/CLTA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLTA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Clathrin Light Chain A/CLTA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Clathrin Light Chain A/CLTA nelle cellule tumorali con espressione di CLTA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.