CKR-9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419702

Panoramica

Ccr9 codifica per CKR-9 (CCR9), un recettore chemiokinico accoppiato a proteine G (GPCR) noto soprattutto per il legame con CCL25 e per il ruolo nel dirigere il traffico chemiotattico dei linfociti. Nel topo, CCR9 contribuisce allo sviluppo dei timociti e ai programmi di homing intestinale modulando i segnali migratori, l’adesione dipendente dalle integrine e il posizionamento all’interno dei microambienti tissutali. La segnalazione di CKR-9 si integra con le vie canoniche dei GPCR, inclusi il flusso di calcio e le cascate MAPK/PI3K, che influenzano lo stato di attivazione, la sopravvivenza e la motilità delle cellule immunitarie. Un’attività disregolata dell’asse CCR9–CCL25 è stata implicata in processi infiammatori a livello delle mucose e in meccanismi che favoriscono una localizzazione aberrante dei leucociti, rilevante per la patologia immunomediata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccr9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccr9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccr9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CKR-9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccr9 per lo studio della segnalazione di CKR-9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccr9 critici per la funzione di CKR-9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccr9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CKR-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CKR-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccr9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CKR-9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CKR-9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccr9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccr9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.