Plásmido Doble Nickase (h) CKR-3: sc-404160-NIC

CCR3 (CKR-3) es un receptor de quimiocinas acoplado a proteína G que se une a ligandos de la familia de las eotaxinas, como CCL11, CCL24 y CCL26, para dirigir la quimiotaxis, la adhesión y la activación de eosinófilos, basófilos y subpoblaciones de células inmunitarias polarizadas hacia Th2. Tras la unión del ligando, CCR3 se acopla a proteínas Gi para regular los flujos de calcio intracelular, la señalización de PI3K/AKT y MAPK, la remodelación del citoesqueleto y el tráfico dependiente de integrinas a través del endotelio. El reclutamiento de leucocitos dependiente de CCR3 moldea microambientes inflamatorios en superficies mucosas y de las vías respiratorias, y se estudia ampliamente en el contexto de la inflamación alérgica, el asma y los trastornos eosinofílicos. Los cambios en la actividad de CCR3 y en sus patrones de expresión también se investigan en estados inflamatorios crónicos y en la inmunidad asociada a tumores, donde los gradientes de quimiocinas influyen en la infiltración de células inmunitarias.

CKR-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CCR3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CCR3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CCR3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CCR3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.