CKR-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404160-NIC

CCR3 (CKR-3) è un recettore per chemiochine accoppiato a proteine G che lega ligandi della famiglia delle eotassine, come CCL11, CCL24 e CCL26, per dirigere la chemiotassi, l’adesione e l’attivazione di eosinofili, basofili e di sottopopolazioni di cellule immunitarie polarizzate Th2. Dopo il legame con il ligando, CCR3 si accoppia a proteine Gi per regolare il flusso intracellulare di calcio, la segnalazione PI3K/AKT e MAPK, il rimodellamento del citoscheletro e il traffico integrina-dipendente attraverso l’endotelio. Il reclutamento leucocitario dipendente da CCR3 modella i microambienti infiammatori a livello delle superfici mucosali e delle vie aeree ed è ampiamente studiato nel contesto dell’infiammazione allergica, dell’asma e dei disturbi eosinofilici. Alterazioni dell’attività e dei pattern di espressione di CCR3 vengono inoltre esaminate negli stati infiammatori cronici e nell’immunità associata ai tumori, dove i gradienti di chemiochine influenzano l’infiltrazione delle cellule immunitarie.

CKR-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCR3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCR3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCR3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCR3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.