citrin Plasmide Double Nickase (m): sc-424510-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- citrin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il citrin Double Nickase Plasmid (m) e il citrin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc25a13. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: citrin Antibody (D-7): sc-393303
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
citrin Plasmide Double Nickase (m) | sc-424510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
citrin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc25a13 nel topo codifica la citrina, un trasportatore mitocondriale di aspartato–glutammato della membrana interna che sostiene la navetta malato–aspartato e collega l’equilibrio redox tra citosol e mitocondri al metabolismo intermedio. Scambiando aspartato e glutammato attraverso la membrana interna, la citrina contribuisce a coordinare il metabolismo degli amminoacidi, la gestione dell’azoto collegata al ciclo dell’urea e il flusso gluconeogenico attraverso la disponibilità di aspartato. Un’alterazione della funzione di SLC25A13 è associata a fenotipi di disregolazione metabolica nei sistemi modello, rendendo Slc25a13 un nodo utile per studiare il trasporto mitocondriale, il metabolismo energetico degli epatociti e l’omeostasi sistemica dei nutrienti. Nei topi, la perturbazione del trasporto dipendente dalla citrina offre un approccio gestibile per interrogare le vie che collegano l’attività dei trasportatori mitocondriali allo stato redox e al metabolismo dell’azoto.
citrin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc25a13 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc25a13. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc25a13. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc25a13 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.