CIRP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419664

Descripción general

Cirbp codifica la proteína de unión a ARN inducible por frío (CIRP), una chaperona de ARN sensible al estrés que modula la estabilidad, el transporte y la traducción del ARNm. En células de ratón, CIRP se induce por hipotermia, irradiación UV, hipoxia y estrés oxidativo, y contribuye a la regulación génica postranscripcional dentro de los gránulos de estrés y de complejos ribonucleoproteicos relacionados. Las vías vinculadas a CIRP se interconectan con las respuestas celulares al estrés, la señalización inflamatoria y la regulación circadiana y metabólica mediante el control selectivo de transcritos diana. La actividad desregulada de CIRP se ha asociado con respuestas inmunitarias y tisulares al estrés alteradas, lo que convierte a Cirbp en un locus útil para estudios mecanísticos en inflamación, neurobiología y adaptación al estrés relevante para el cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CIRP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cirbp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cirbp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cirbp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CIRP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cirbp para la investigación de la señalización de CIRP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cirbp críticos para la función de CIRP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cirbp para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CIRP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CIRP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cirbp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CIRP (m) y el plásmido HDR CIRP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cirbp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cirbp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.