Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) CIN85: sc-402573-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CIN85 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CIN85 (h) y el plásmido de doble nickasa CIN85 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SH3KBP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CIN85 Anticuerpo (A-7): sc-166862
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CIN85 | sc-402573-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3KBP1 codifica CIN85, una proteína andamiaje multiadaptadora que coordina el tráfico endocítico y la atenuación de la señal mediante el ensamblaje de complejos aguas abajo de los receptores tirosina quinasa, incluido EGFR, a través de interacciones con ligasas de ubiquitina Cbl y con la maquinaria endocítica. A través de sus dominios SH3 y de interfaces de unión a motivos ricos en prolina, CIN85 regula la internalización del receptor, su ubiquitinación y su clasificación hacia lisosomas, modulando la amplitud y la duración de la señalización MAPK y PI3K-AKT. CIN85 también contribuye a la remodelación del citoesqueleto, la formación de invadopodios y la dinámica vesicular, procesos vinculados a la migración celular y a fenotipos invasivos en múltiples contextos patológicos. Las vías asociadas a CIN85 desreguladas se han estudiado en relación con la señalización oncogénica, el recambio de receptores inmunitarios y alteraciones del tráfico de membrana.
CIN85 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SH3KBP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SH3KBP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SH3KBP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SH3KBP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.