Chx10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401103

Panoramica

VSX2 (Chx10) è un fattore di trascrizione homeobox che svolge un ruolo centrale nella specificazione del campo oculare e nella proliferazione delle cellule progenitrici retiniche, contribuendo a coordinare la neurogenesi e le decisioni di destino cellulare durante la retinogenesi dei vertebrati. Regola programmi trascrizionali che controllano lo sviluppo dei neuroni bipolari della retina e il mantenimento dell’identità della retina neurale, interfacciandosi con reti di segnalazione dello sviluppo come WNT/β-catenina, SHH e la regolazione genica associata a Notch. Un’alterata funzione di VSX2 è stata collegata a malformazioni oculari congenite, tra cui microftalmia e anoftalmia, e una sua espressione deregolata è rilevante per gli studi sui meccanismi delle distrofie retiniche e sullo sviluppo di organoidi retinici derivati da cellule staminali. In quanto regolatore legante il DNA, Chx10 è comunemente studiato per i suoi effetti sulle traiettorie di differenziamento, l’impegno di linea e le reti di regolazione genica in modelli oculari e neurali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Chx10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VSX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VSX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VSX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Chx10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VSX2 per lo studio della segnalazione di Chx10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VSX2 critici per la funzione di Chx10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VSX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Chx10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Chx10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VSX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Chx10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Chx10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VSX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VSX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.