CHST1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403978-ACT

CHST1 codifica la carboidrato solfotransferasi 1, un enzima residente nel Golgi che trasferisce gruppi solfato su residui di galattosio di glicoproteine e glicolipidi, contribuendo alla biosintesi di glicosaminoglicani solfatati e di glicoconiugati correlati. Modellando i pattern di solfatazione sulla superficie cellulare e nella matrice extracellulare, CHST1 influenza le interazioni ligando–recettore, l’adesione dei leucociti e la segnalazione di fattori di crescita/citochine nell’ambito delle vie del metabolismo della glicosilazione e dei proteoglicani. Alterazioni della solfatazione possono rimodellare il glicocalice e modulare il riconoscimento immunitario e la migrazione cellulare, collegando l’attività di CHST1 a meccanismi rilevanti per l’infiammazione e il comportamento delle cellule tumorali. CHST1 è quindi di interesse per studi sulla regolazione, dipendente dai glicani, della segnalazione, dell’adesione e delle interazioni con il microambiente.

CHST1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHST1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CHST1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHST1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHST1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CHST1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHST1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CHST1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CHST1 nelle cellule tumorali con espressione di CHST1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.