ChREBP Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401803-LAC

MLXIPL codifica la proteina legante gli elementi di risposta ai carboidrati (ChREBP), un fattore di trascrizione sensibile al glucosio che collega il flusso intracellulare di carboidrati a programmi genici che controllano la glicolisi, la lipogenesi de novo e la sintesi dei trigliceridi. In risposta ai metaboliti dei carboidrati, ChREBP trasloca nel nucleo e si lega agli elementi di risposta ai carboidrati per regolare enzimi metabolici e trasportatori, integrando lo stato nutrizionale con le vie di accumulo energetico a livello epatico e adiposo. Questo asse regolatorio interseca la segnalazione insulinica, la modulazione da parte della proteina chinasi attivata da AMP (AMPK) e reti trascrizionali più ampie che governano l’omeostasi lipidica. Un’attività di ChREBP deregolata è stata associata a fenotipi metabolici rilevanti per la steatosi epatica, la resistenza all’insulina e il rischio cardiometabolico, rendendo MLXIPL un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione genica guidata dai nutrienti.

Le particelle di attivazione lentivirale ChREBP (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MLXIPL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ChREBP (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MLXIPL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ChREBP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MLXIPL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.