CHP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406233

Panoramica

CHP1 codifica la calcineurin B homologous protein (CHP), un regolatore miristoilato legante Ca2+ con dominio EF-hand, che si associa a molteplici trasportatori di membrana e proteine di segnalazione. CHP è nota soprattutto per modulare l’attività dello scambiatore Na+/H+, collegando così la dinamica intracellulare del Ca2+ all’omeostasi del pH, al trasporto ionico e al controllo del volume cellulare e dell’organizzazione del citoscheletro. Attraverso queste funzioni può influenzare vie che regolano la polarità epiteliale, la proliferazione e le risposte allo stress. La disregolazione della segnalazione del Ca2+ e della regolazione degli scambiatori che coinvolgono CHP1 è stata studiata in contesti quali il comportamento delle cellule tumorali e altri disturbi in cui l’alterazione dell’equilibrio ionico e della regolazione del pH contribuisce alla fisiopatologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHP1 per lo studio della segnalazione di CHP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHP1 critici per la funzione di CHP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.