ChoK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403793

Panoramica

CHKA codifica la colina chinasi alfa (ChoK), l’enzima limitante la velocità che fosforila la colina a fosfocolina nella via di Kennedy per la biosintesi della fosfatidilcolina. Controllando i pool di fosfocolina e la produzione di fosfolipidi di membrana, ChoK collega il metabolismo lipidico alla progressione del ciclo cellulare, alla biogenesi di membrana e alle reti di trasduzione del segnale che dipendono da secondi messaggeri derivati dalla fosfatidilcolina. Un’alterata attività di CHKA è stata associata alla riprogrammazione metabolica e a programmi di proliferazione deregolati osservati in molteplici contesti cellulari rilevanti per la patologia, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione guidata dai lipidi. Gli studi su CHKA/ChoK spesso si intersecano con vie che regolano la dinamica di membrana, le risposte allo stress e la segnalazione oncogenica mediata da fattori di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ChoK (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHKA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHKA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHKA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ChoK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHKA per lo studio della segnalazione di ChoK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHKA critici per la funzione di ChoK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHKA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ChoK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ChoK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHKA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ChoK Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ChoK (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHKA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHKA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.