Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Chk2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424521
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Chk2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Chk2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Chk2 Antibody (A-11): sc-17747
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Chk2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424521 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Chek2 codifica la chinasi del checkpoint Chk2, una chinasi serina/treonina attivata a valle di ATM in risposta a rotture a doppio filamento del DNA. Una volta fosforilata, Chk2 propaga il segnale di danno al DNA modulando effettori quali p53 e le fosfatasi CDC25, influenzando così il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare, la scelta della via di riparazione del DNA, la senescenza e l’apoptosi. Nei sistemi murini, l’attività di Chek2 viene comunemente studiata in ricerche sulla stabilità del genoma, sullo stress replicativo e sulle risposte al danno ossidativo. La deregolazione della segnalazione CHEK2/Chk2 è ampiamente rilevante per difetti della risposta al danno del DNA associati alle neoplasie e può modificare la sensibilità allo stress genotossico nei modelli sperimentali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Chk2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chek2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chek2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chek2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Chk2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chek2 per lo studio della segnalazione di Chk2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Chek2 critici per la funzione di Chk2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chek2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Chk2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Chk2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chek2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Chk2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Chk2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chek2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chek2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.