Chk1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400223-LAC

Il gene umano **CHEK1** codifica la checkpoint kinase 1 (Chk1), una chinasi serina/treonina che coordina la risposta al danno al DNA dipendente da ATR in condizioni di stress replicativo. Chk1 regola la progressione della fase S e il checkpoint G2/M fosforilando effettori che limitano l’attività delle CDK, stabilizzano le forche di replicazione bloccate e favoriscono la riparazione associata alla ricombinazione omologa e l’arresto del ciclo cellulare. Questo asse di segnalazione interagisce con vie che governano l’integrità del genoma, inclusi la protezione delle forche di replicazione, il controllo dell’attivazione delle origini e l’ingresso in mitosi, rendendo l’attività di CHEK1 altamente rilevante per i meccanismi di instabilità cromosomica. La deregolazione dell’output della via di CHEK1 è spesso studiata nel contesto della biologia tumorale, delle risposte allo stress genotossico e dei determinanti della sensibilità a perturbazioni che danneggiano il DNA nei sistemi modello.

Le particelle di attivazione lentivirale Chk1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CHEK1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Chk1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CHEK1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Chk1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CHEK1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.