Chk1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400223-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Chk1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Chk1 Double Nickase Plasmid (h) e il Chk1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHEK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Chk1 Antibody (G-4): sc-8408
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Chk1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400223-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Chk1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400223-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHEK1 codifica la checkpoint kinase 1 (Chk1), una chinasi serina/treonina che coordina la risposta al danno al DNA e la segnalazione dello stress replicativo per preservare la stabilità del genoma. Attivata principalmente a valle di ATR, Chk1 fosforila substrati come le fosfatasi CDC25 per limitare l’attività delle CDK, imporre i checkpoint di fase S e G2/M e stabilizzare le forcelle di replicazione bloccate. Attraverso queste funzioni, CHEK1 integra la progressione del ciclo cellulare con le vie di riparazione del DNA, inclusa la ricombinazione omologa e i meccanismi di protezione della forcella. Una segnalazione di Chk1 deregolata è frequentemente associata alla tolleranza allo stress replicativo e all’instabilità cromosomica osservate in molteplici tipi di tumore, rendendola un nodo ampiamente studiato nella biologia dello stress oncogenico.
Chk1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHEK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHEK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHEK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHEK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.