Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CHDH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432328
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CHDH Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CHDH, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CHDH Antibody (C-5): sc-393885
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CHDH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-432328 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Chdh codifica la colina deidrogenasi (CHDH), un enzima della membrana interna mitocondriale che catalizza l’ossidazione della colina a betaina aldeide, sostenendo la produzione a valle di betaina e il metabolismo a un carbonio. Grazie al suo legame con la disponibilità di donatori di metili e con l’equilibrio degli osmòliti, CHDH influenza l’omeostasi dei fosfolipidi, la bioenergetica mitocondriale e le risposte cellulari allo stress metabolico e ossidativo. Nei topi, l’alterazione dell’ossidazione della colina può influire sulla gestione epatica dei lipidi e sul bilancio energetico sistemico, collegando i pathway associati a CHDH a fenotipi metabolici rilevanti per la steatosi epatica e per tratti di rischio cardiometabolico correlati. Queste funzioni rendono CHDH un nodo utile per studiare il metabolismo mitocondriale, la regolazione dipendente dalla metilazione e le interazioni nutriente–gene nella fisiologia dei mammiferi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHDH (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chdh in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chdh insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chdh a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHDH.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chdh per lo studio della segnalazione di CHDH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Chdh critici per la funzione di CHDH
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chdh per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CHDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CHDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chdh. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CHDH Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CHDH (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chdh per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chdh definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.