CHD7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404017-ACT

CHD7 (proteina 7 legante il DNA con attività elicasi del cromodominio) è un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente che interpreta i segni istonici tramite i propri cromodomini per regolare l’accessibilità di enhancer e promotori. Nelle cellule umane, CHD7 coordina programmi trascrizionali che modellano la specificazione di linea, lo sviluppo della cresta neurale e l’organogenesi modulando il posizionamento dei nucleosomi e l’architettura della cromatina di ordine superiore. La funzione di CHD7 si interseca con vie regolatorie epigenetiche e trascrizionali fondamentali, influenzando l’espressione genica guidata dalla RNA polimerasi II e le transizioni di stato della cromatina durante la differenziazione. L’alterazione genetica o il dosaggio anomalo di CHD7 è associato a fenotipi di disturbi dello sviluppo, inclusa la sindrome CHARGE, e la sua disregolazione è oggetto di studio in reti trascrizionali legate al neurosviluppo e al cancro.

CHD7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHD7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CHD7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHD7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHD7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CHD7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHD7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CHD7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CHD7 nelle cellule tumorali con espressione di CHD7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.