Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CFTR Plasmide Double Nickase (h): sc-400653-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CFTR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CFTR Double Nickase Plasmid (h) e il CFTR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CFTR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CFTR Antibody (A-3): sc-376683
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CFTR Plasmide Double Nickase (h) | sc-400653-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CFTR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400653-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CFTR codifica il regolatore della conduttanza transmembrana della fibrosi cistica, un canale ionico della famiglia ABC (ATP-binding cassette) regolato da cAMP/PKA, che trasporta cloruro e bicarbonato attraverso le membrane epiteliali. L’attività di CFTR coordina la secrezione di fluidi transepiteliale, l’idratazione della superficie delle vie aeree e la clearance mucociliare, e interagisce con reti di trasporto ionico che coinvolgono ENaC e gli scambiatori SLC26 per mantenere l’equilibrio elettrolitico dell’epitelio. L’alterazione del trasporto dipendente da CFTR modifica l’omeostasi epiteliale e la segnalazione infiammatoria in tessuti quali vie aeree, pancreas e intestino. La variabilità genetica di CFTR è fortemente associata alla fibrosi cistica e contribuisce a un più ampio spettro di patologie correlate a CFTR, rendendolo un bersaglio centrale per studi meccanicistici della fisiologia epiteliale e della regolazione dei canali.
CFTR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CFTR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CFTR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CFTR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CFTR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.