CETP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405829-ACT

La CETP (cholesteryl ester transfer protein) umana è una glicoproteina plasmatica secreta che media il trasferimento di esteri del colesterolo e trigliceridi tra le HDL e le lipoproteine contenenti apoB, modellando il rimodellamento delle lipoproteine e il trasporto inverso del colesterolo. Regolando la distribuzione dell’HDL-C e il flusso lipidico, la CETP influenza i percorsi che governano l’omeostasi dei lipidi, la composizione delle particelle lipoproteiche e la clearance epatobiliare del colesterolo. Alterazioni dell’attività o dell’espressione della CETP sono state associate a fenotipi di dislipidemia e a variazioni del rischio di malattie cardiovascolari e metaboliche, rendendola un bersaglio ampiamente studiato nella ricerca sul metabolismo lipidico.

CETP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CETP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CETP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CETP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CETP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CETP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CETP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CETP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CETP nelle cellule tumorali con espressione di CETP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.