ceruloplasmin Plasmide Double Nickase (m): sc-419776-NIC

Il gene Cp del topo codifica la ceruloplasmina, una ferroxidasi multicopper secreta che ossida Fe2+ a Fe3+ per favorire il caricamento della transferrina e il trasporto sistemico del ferro. In cooperazione con l’esportazione del ferro mediata dalla ferroportina, la ceruloplasmina contribuisce a mantenere l’omeostasi del ferro cellulare, limita l’accumulo di ferro redox-attivo e influenza le risposte allo stress ossidativo. L’attività della ceruloplasmina si interseca con il metabolismo del rame e con i programmi infiammatori della fase acuta, collegando la secrezione degli epatociti e la gestione del ferro nei macrofagi a una regolazione metabolica più ampia. La disregolazione di Cp è utilizzata come modello per studiare alterazioni dell’equilibrio ferro/rame e il danno ossidativo rilevanti per la neurobiologia, la fisiologia epatica e la patologia infiammatoria nei sistemi murini.

ceruloplasmin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cp nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cp. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cp. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cp interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.