Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cerberus Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417362
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cerberus Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico cerberus, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cerberus Antibody (C-1): sc-515324
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cerberus Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417362 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CER1 codifica cerberus, un antagonista secreto di importanti vie dei morfogeni che si lega e inibisce membri delle famiglie BMP, NODAL/TGF-β e WNT, modulando i gradienti di segnalazione extracellulare. Attraverso queste interazioni, cerberus contribuisce alle decisioni di patterning embrionale, inclusa la specificazione del mesendoderma e lo sviluppo neurale anteriore, limitando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD e da β-catenina. Un’espressione deregolata di CER1 è stata riportata in contesti che coinvolgono differenziamento aberrante, transizione epitelio-mesenchimale e segnalazione alterata dei fattori di crescita, rendendolo rilevante per studi sui disturbi dello sviluppo e sul rimodellamento oncogenico delle vie di segnalazione. In quanto regolatore secreto, CER1 è anche utile per indagare il controllo paracrino del destino cellulare nella differenziazione di cellule staminali e nei modelli di organoidi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cerberus (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CER1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CER1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CER1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cerberus.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CER1 per lo studio della segnalazione di cerberus, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CER1 critici per la funzione di cerberus
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CER1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal cerberus CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cerberus CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CER1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal cerberus Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cerberus (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CER1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CER1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.