CEP135 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411306-ACT

O CEP135 humano codifica uma proteína central do centrosoma que se localiza nas extremidades proximais dos centríolos e sustenta a biogênese dos centríolos, a coesão e a integridade estrutural ao longo do ciclo celular. O CEP135 atua na maturação do centrosoma e em processos de organização de microtúbulos que coordenam a montagem do fuso bipolar e a segregação fiel dos cromossomos durante a mitose. Ao influenciar o número e a arquitetura dos centrosomos, o CEP135 está ligado a mecanismos que governam a estabilidade genômica e a proliferação celular. A desregulação de vias associadas ao centrosoma envolvendo o CEP135 tem sido investigada em distúrbios do desenvolvimento e em contextos relacionados ao câncer, nos quais se observam dinâmica aberrante do fuso e aneuploidia.

CEP135 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CEP135 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CEP135 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CEP135 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CEP135, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CEP135. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CEP135 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CEP135 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CEP135 em células tumorais com expressão de CEP135 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.