CEP135 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411306-ACT

Il gene umano **CEP135** codifica una proteina centrosomiale fondamentale che si localizza alle estremità prossimali dei centrioli e supporta la biogenesi dei centrioli, la loro coesione e l’integrità strutturale durante il ciclo cellulare. CEP135 svolge un ruolo nei processi di maturazione del centrosoma e di organizzazione dei microtubuli che coordinano l’assemblaggio del fuso bipolare e la corretta segregazione dei cromosomi durante la mitosi. Influenzando il numero e l’architettura dei centrosomi, CEP135 è collegato a meccanismi che regolano la stabilità genomica e la proliferazione cellulare. La disregolazione di vie associate al centrosoma che coinvolgono CEP135 è stata studiata in contesti di disturbi dello sviluppo e di oncologia, in cui si osservano dinamiche del fuso aberranti e aneuploidia.

CEP135 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEP135 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEP135 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEP135 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEP135, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEP135. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEP135 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEP135 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEP135 nelle cellule tumorali con espressione di CEP135 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.