Centaurin α1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407463

Panoramica

ADAP1 codifica la centaurina α1, una proteina attivatrice della GTPasi Arf (Arf GAP) con un dominio di omologia alla pleckstrina (PH) che collega la segnalazione dei fosfoinositidi al traffico di membrana e al rimodellamento del citoscheletro di actina. Modulando eventi di endocitosi e di trasporto vescicolare dipendenti da Arf, la centaurina α1 contribuisce a coordinare il riciclo dei recettori e la propagazione del segnale a valle dei lipidi generati da PI3K. La proteina è stata associata alla regolazione della migrazione cellulare e della dinamica di adesione, processi centrali per l’organizzazione dei tessuti e la capacità di risposta delle cellule. Alterazioni dell’attività di ADAP1 sono state studiate in contesti in cui una regolazione anomala del traffico e del citoscheletro contribuisce a fenotipi associati a malattia, inclusi comportamento invasivo e segnalazione aberrante.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Centaurin α1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADAP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADAP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADAP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Centaurin α1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADAP1 per lo studio della segnalazione di Centaurin α1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADAP1 critici per la funzione di Centaurin α1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADAP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Centaurin α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Centaurin α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADAP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Centaurin α1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Centaurin α1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADAP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADAP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.