CENP-S Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417249

Panoramica

CENPS codifica la proteina del centromero S (CENP-S), un componente conservato della rete costitutiva associata al centromero che поддержisce l’integrità del cinetocore e la corretta segregazione dei cromosomi. CENP-S partecipa all’assemblaggio del centromero e del cinetocore e contribuisce alla stabilità del genoma promuovendo una progressione mitotica adeguata. L’alterazione delle vie del centromero e del cinetocore è strettamente correlata all’instabilità cromosomica e all’aneuploidia, processi spesso studiati nel contesto della biologia del cancro e dello stress proliferativo. CENP-S viene inoltre studiata all’intersezione tra le risposte al danno al DNA associate alla replicazione e la fedeltà mitotica, ambito in cui difetti possono rendere le cellule più sensibili a perturbazioni genotossiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-S (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CENPS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CENPS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CENPS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CENP-S.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CENPS per lo studio della segnalazione di CENP-S, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CENPS critici per la funzione di CENP-S
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CENPS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CENP-S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CENP-S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CENPS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CENP-S Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CENP-S (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CENPS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CENPS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.