CENP-C Plasmide Double Nickase (h): sc-403000-NIC

CENPC codifica la proteina del centromero C (CENP-C), un componente fondamentale del cinetocore interno che si lega alla cromatina centromerica e contribuisce a organizzare la rete costitutiva associata al centromero necessaria per un attacco stabile ai microtubuli. CENP-C coordina l’assemblaggio del cinetocore e la segnalazione del checkpoint del fuso per garantire una corretta congressione e segregazione dei cromosomi durante la mitosi, collegando l’identità del centromero alla progressione del ciclo cellulare. L’alterazione dell’architettura del cinetocore dipendente da CENP-C contribuisce alla mis-segregazione cromosomica e all’aneuploidia, processi spesso associati a instabilità genomica nei disturbi proliferativi. Di conseguenza, CENP-C è ampiamente studiata nella biologia del centromero, nella fedeltà mitotica e nei meccanismi che accoppiano l’organizzazione della cromatina all’eredità cromosomica.

CENP-C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CENPC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CENPC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CENPC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CENPC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.