CENP-A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402359

Panoramica

CENPA codifica CENP-A, una variante dell’istone H3 che sostituisce l’H3 canonico nei centromeri per stabilire la cromatina centromerica e definire l’identità del cinetocoro. La deposizione e il mantenimento di CENP-A sono coordinati con le vie di assemblaggio del centromero e con la progressione del ciclo cellulare mitotico, supportando il corretto allineamento e la corretta segregazione dei cromosomi. Alterazioni dei livelli di CENP-A o della sua localizzazione ai centromeri destabilizzano la funzione del cinetocoro, favoriscono l’instabilità cromosomica e l’aneuploidia, e sono frequentemente studiate nel contesto dei difetti di mantenimento del genoma osservati in numerosi modelli di cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CENPA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CENPA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CENPA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CENP-A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CENPA per lo studio della segnalazione di CENP-A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CENPA critici per la funzione di CENP-A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CENPA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CENP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CENP-A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CENPA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CENP-A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CENP-A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CENPA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CENPA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.