Cdx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419618-ACT

Cdx2 (homeobox caudal tipo 2) codifica um fator de transcrição homeobox que estabelece e mantém a padronização corporal posterior durante a embriogênese e é um regulador-chave da especificação do trofectoderma e da diferenciação do epitélio intestinal em camundongo. Ao se ligar a motivos de DNA específicos de sequência, o CDX2 coordena programas transcricionais que se conectam à sinalização Wnt/β-catenina, à polaridade epitelial e ao comprometimento de linhagem, influenciando a proliferação e a maturação do epitélio intestinal. A expressão desregulada de CDX2 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e a uma identidade epitelial aberrante, tornando-o um marcador amplamente utilizado e um nó mecanístico em estudos de distúrbios do desenvolvimento e da biologia de doenças gastrointestinais. In vitro, o Cdx2 é frequentemente utilizado para modelar transições de destino celular, maturação de organoides e dinâmica de redes transcricionais em sistemas de células-tronco e progenitoras.

Cdx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cdx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cdx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cdx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cdx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdx2 em células tumorais com expressão de Cdx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.