CDKN2C/p18 INK4c Plasmide Double Nickase (h): sc-401214-NIC

CDKN2C codifica p18INK4c, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti che si lega a CDK4/6 per limitare l’attività chinasica dipendente dalla ciclina D e imporre il checkpoint del ciclo cellulare G1/S. Riducendo la fosforilazione di RB1 e i programmi trascrizionali a valle mediati da E2F, CDKN2C contribuisce al controllo della proliferazione, alla differenziazione cellulare e alle risposte associate alla senescenza. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CDKN2C sono state collegate alla progressione deregolata del ciclo cellulare osservata in molteplici contesti tumorali e nelle neoplasie ematologiche, ed è spesso studiato insieme ad altri regolatori della famiglia INK4. CDKN2C è inoltre rilevante per le vie che integrano la segnalazione mitogena con il controllo dei checkpoint, inclusa la regolazione degli assi RB/E2F e CDK4/6.

CDKN2C/p18 INK4c Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDKN2C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDKN2C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDKN2C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDKN2C interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.