CDKN2C/p18 INK4c Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401214

Panoramica

CDKN2C codifica p18 INK4c, un membro della famiglia INK4 degli inibitori delle chinasi ciclina-dipendenti, che si lega a CDK4 e CDK6 per limitare la fosforilazione di RB guidata dalla ciclina D e garantire il checkpoint G1/S. Limitando i programmi trascrizionali dipendenti da E2F, CDKN2C contribuisce al controllo della progressione del ciclo cellulare, dell’impegno di linea e della quiescenza cellulare in molteplici tessuti. L’alterazione della funzione di CDKN2C è spesso studiata nel contesto della deregolazione del segnale CDK4/6–RB, dell’instabilità genomica e di fenotipi proliferativi rilevanti per la biologia del cancro. CDKN2C è inoltre utilizzato come nodo meccanicistico per collegare gli input di segnalazione mitogenica con l’integrità dei checkpoint in modelli di stress oncogenico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CDKN2C/p18 INK4c (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDKN2C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDKN2C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDKN2C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CDKN2C/p18 INK4c.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDKN2C per lo studio della segnalazione di CDKN2C/p18 INK4c, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDKN2C critici per la funzione di CDKN2C/p18 INK4c
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDKN2C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CDKN2C/p18 INK4c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDKN2C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CDKN2C/p18 INK4c Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CDKN2C/p18 INK4c (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDKN2C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDKN2C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.