Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Cdc6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400796
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdc6 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Cdc6, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdc6 Antibody (180.2): sc-9964
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdc6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400796 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CDC6 codifica per Cdc6, un’ATPasi essenziale che abilita (“licenzia”) le origini di replicazione del DNA assemblando il complesso di pre-replicazione insieme a ORC, CDT1 e MCM2–7 durante la fase G1. La stretta regolazione di CDC6 attraverso l’attività delle CDK e il turnover mediato dall’ubiquitina coordina la transizione G1/S e contribuisce a garantire il corretto timing della replicazione e i checkpoint di stabilità del genoma. Un’espressione o un controllo deregolati di CDC6 possono favorire stress da ri-replicazione, segnalazione di danno al DNA e instabilità cromosomica, caratteristiche frequentemente associate alla trasformazione oncogena. Per questo CDC6 è ampiamente studiato nel controllo del ciclo cellulare, nelle risposte allo stress replicativo e nei meccanismi che collegano una licenza delle origini alterata all’instabilità genomica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc6.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC6 per lo studio della segnalazione di Cdc6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CDC6 critici per la funzione di Cdc6
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Cdc6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdc6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdc6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.