Cdc34 Plasmide Double Nickase (h): sc-403783-NIC

Il gene umano **CDC34** codifica per **Cdc34**, un enzima E2 coniugante l’ubiquitina che collabora con le ligasi E3 di tipo **SCF** (SKP1–CUL1–F-box) per assemblare catene di poliubiquitina legate in **K48** e promuovere la degradazione proteasomiale di regolatori chiave del ciclo cellulare e della replicazione del DNA. Controllando l’ubiquitinazione di substrati quali gli inibitori delle CDK e i fattori di “licensing” della replicazione, Cdc34 contribuisce a coordinare la progressione **G1/S**, la segnalazione dei checkpoint e la stabilità del genoma. Un’attività o un’espressione deregolata di CDC34 è stata associata ad alterazioni della proteostasi e a programmi proliferativi aberranti osservati in molteplici contesti rilevanti per il cancro, rendendolo un nodo utile per studiare le dipendenze della via dell’ubiquitina. CDC34 viene inoltre sfruttato per interrogare il circuito delle ligasi **cullin-RING**, le dinamiche della segnalazione dell’ubiquitina e le risposte adattative allo stress proteotossico o allo stress replicativo.

Cdc34 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC34 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC34. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC34. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC34 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.