Cdc2L5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403798-ACT

O CDK13 codifica a quinase humana dependente de ciclina Cdc2L5, uma quinase de serina/treonina que atua em conjunto com a Ciclina K para coordenar a fosforilação da RNA polimerase II e regular o alongamento da transcrição e o processamento de RNA co-transcricional. Por meio dessas atividades, o CDK13 contribui para o controle de programas de expressão gênica ligados à progressão do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e à diferenciação, interagindo com redes de transcrição e de splicing. A disrupção ou desregulação do CDK13 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a dependências transcricionais relevantes em câncer, tornando-o um ponto útil para estudar circuitos de regulação gênica. A modulação experimental da Cdc2L5 sustenta estudos mecanísticos sobre o metabolismo de RNA acoplado à transcrição e efeitos em nível de vias sobre a aptidão celular e a sinalização de estresse.

Cdc2L5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdc2L5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdc2L5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdc2L5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdc2L5 em células tumorais com expressão de CDK13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.