Cdc20 Plasmide Double Nickase (h): sc-400583-NIC

CDC20 codifica Cdc20, un co-attivatore centrale del complesso promotore dell'anafase/ciclosoma (APC/C) che coordina la segnalazione del checkpoint di assemblaggio del fuso con la degradazione, mediata dall'ubiquitina, di regolatori mitotici chiave, tra cui securina e ciclina B1. Promuovendo un avvio tempestivo dell'anafase e l'uscita dalla mitosi, Cdc20 contribuisce a mantenere l'accuratezza della segregazione cromosomica e la stabilità genomica complessiva. L'attività di CDC20 è regolata da proteine del checkpoint come MAD2 e BUBR1, collegandola a vie di sorveglianza del ciclo cellulare che limitano l'aneuploidia. Un'espressione deregolata di CDC20 o un controllo difettoso del checkpoint è frequentemente associato a fenotipi proliferativi e a instabilità cromosomica osservati in molteplici contesti di ricerca oncologica.

Cdc20 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC20 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC20. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC20. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC20 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.