CD81 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-400185-ACT-2

Il gene umano CD81 codifica una proteina di membrana della superfamiglia delle tetraspanine, espressa sulla superficie cellulare, che organizza microdomini di membrana e regola il raggruppamento dei recettori, l’adesione e la trasduzione del segnale in cellule immunitarie e non immunitarie. CD81 partecipa alla funzione del co-recettore dei linfociti B insieme a CD19/CD21, modula il traffico dipendente dalle integrine e influenza vie che controllano la presentazione dell’antigene, l’attivazione cellulare e la biogenesi di vescicole/esosomi. Una disregolazione dell’espressione o della compartimentalizzazione di CD81 è stata associata ad alterazioni della segnalazione immunitaria e del comportamento delle cellule tumorali, a supporto del suo impiego come marcatore e nodo meccanicistico nella ricerca in immunologia e oncologia. CD81 è ampiamente utilizzata negli studi sui complessi di proteine di membrana, nella caratterizzazione delle vescicole extracellulari e nelle interazioni patogeno–ospite, in cui le reti di tetraspanine governano l’ingresso e la diffusione da cellula a cellula.

CD81 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD81 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD81 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD81 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD81, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD81. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD81 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD81 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD81 nelle cellule tumorali con espressione di CD81 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.