CD79A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401827-ACT

CD79A codifica la subunità Ig-α del complesso del recettore dell’antigene dei linfociti B (BCR), che si associa a CD79B per collegare il riconoscimento dell’antigene alla segnalazione intracellulare. I suoi motivi di attivazione immunorecettoriali basati su tirosina (ITAM) vengono fosforilati per avviare cascate dipendenti da SYK che coinvolgono le vie PI3K–AKT, BTK, NF-κB e MAPK, modulando attivazione, proliferazione e sopravvivenza dei linfociti B. L’espressione di CD79A è strettamente legata all’identità di linea B e influenza la selezione guidata dall’antigene durante lo sviluppo e la differenziazione. La deregolazione della segnalazione del BCR e alterazioni dell’attività di CD79A sono implicate in disfunzioni immunitarie di origine B e nella biologia delle malattie ematologiche, supportandone l’uso come marcatore meccanicistico nella ricerca in immunologia e oncologia.

CD79A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD79A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD79A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD79A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD79A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD79A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD79A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD79A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD79A nelle cellule tumorali con espressione di CD79A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.