CD73 Plasmide Double Nickase (m): sc-423919-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD73 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD73 Double Nickase Plasmid (m) e il CD73 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nt5e. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD73 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD73 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Nt5e** codifica **CD73** (ecto-5′-nucleotidasi), un ectoenzima ancorato tramite GPI che catalizza la defosforilazione dell’**AMP extracellulare** in **adenosina**, modulando la segnalazione purinergica e il metabolismo dei nucleotidi nel microambiente tissutale. Controllando la disponibilità locale di adenosina, CD73 influenza la segnalazione legata al **cAMP**, gli stati di attivazione delle cellule immunitarie, la biologia della barriera endoteliale e le risposte associate all’ipossia. L’attività di CD73 si inserisce nell’asse **ATP–adenosina** insieme a CD39 e ai recettori dell’adenosina per regolare infiammazione, rimodellamento vascolare e adattamento metabolico. Un’espressione o un’attività di CD73 deregolata è implicata in modelli di infiammazione cronica, danno ischemico, fibrosi e immunosoppressione associata ai tumori, a conferma della sua rilevanza negli studi meccanicistici.
CD73 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nt5e nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nt5e. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nt5e. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nt5e interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.