CD68 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419565

Panoramica

Cd68 codifica CD68, una proteina di membrana lisosomiale/endosomiale fortemente glicosilata, arricchita in monociti, macrofagi tissutali, microglia, cellule dendritiche e osteoclasti. È comunemente utilizzata come marcatore della linea fagocitaria ed è associata a endocitosi, maturazione del fagolisosoma, processamento dell’antigene e programmi di attivazione dell’immunità innata che modulano la segnalazione infiammatoria. Le popolazioni mieloidi CD68-positive influenzano il rimodellamento tissutale, la gestione dei lipidi e le reti citochiniche nel microambiente tumorale e in contesti di infiammazione cronica. L’alterata espressione di Cd68 e l’accumulo di cellule CD68+ sono frequentemente studiati in modelli di neuroinfiammazione, aterosclerosi, fibrosi e malattie autoimmuni come indicatori dell’attivazione e dell’infiltrazione di macrofagi/microglia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD68 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd68 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd68 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd68 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD68.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd68 per lo studio della segnalazione di CD68, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd68 critici per la funzione di CD68
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd68 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD68 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD68 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd68. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD68 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD68 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd68 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd68 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.