CD47 Plasmide Double Nickase (m): sc-421180-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD47 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD47 Double Nickase Plasmid (m) e il CD47 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cd47. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD47 Antibody (MIAP301): sc-12731
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD47 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421180-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD47 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421180-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Cd47 codifica per CD47, un recettore della superfamiglia delle immunoglobuline ampiamente espresso che funziona come segnale di “non mangiarmi” legandosi a SIRPα sui macrofagi, modulando così la fagocitosi e i checkpoint dell’immunità innata. CD47 interagisce anche con la trombospondina-1 influenzando la segnalazione mediata dalle integrine, l’adesione cellulare, la migrazione e le risposte vascolari dipendenti dall’ossido nitrico. Nei tessuti murini, CD47 contribuisce alla rimozione omeostatica delle cellule, alla regolazione della segnalazione infiammatoria e alla modulazione delle interazioni tra tumore e sistema immunitario. Una segnalazione di CD47 deregolata è stata implicata nell’elusione immunitaria, nell’infiammazione cronica e in alterazioni della biologia ematopoietica e vascolare, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici dei percorsi di sorveglianza immunitaria.
CD47 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cd47 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cd47. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cd47. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cd47 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.