Plásmido Doble Nickase (h) CD42b: sc-401273-NIC

GP1BA codifica la glicoproteína plaquetaria Ib alfa (CD42b), una subunidad clave del complejo receptor GPIb-IX-V que media el anclaje de las plaquetas al factor de von Willebrand bajo condiciones de alta cizalladura. La adhesión impulsada por CD42b inicia programas de señalización que coordinan la activación plaquetaria, la remodelación del citoesqueleto y el acoplamiento de integrinas, conectando las respuestas hemostáticas con vías tromboinflamatorias. Este eje se cruza con la mecanotransducción y con redes de señalización proximales al receptor que regulan la agregación plaquetaria y la estabilidad del trombo. La alteración genética o funcional de GP1BA se asocia con defectos hereditarios de adhesión plaquetaria y con fenotipos modificados relacionados con el sangrado o la trombosis, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la biología plaquetaria.

CD42b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GP1BA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GP1BA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GP1BA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GP1BA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.