CD42a Plasmide Double Nickase (h): sc-405500-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD42a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD42a Double Nickase Plasmid (h) e il CD42a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GP9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD42a Antibody (A-9): sc-166420
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD42a Plasmide Double Nickase (h) | sc-405500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD42a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GP9 codifica per la glicoproteina piastrinica CD42a, un componente fondamentale del complesso recettoriale GPIb-IX-V che media l’adesione delle piastrine al fattore di von Willebrand in condizioni di elevato stress di taglio. Attraverso questo complesso, CD42a contribuisce alle fasi iniziali della formazione del tappo emostatico e collega il legame dei ligandi extracellulari a eventi di segnalazione intracellulare che regolano il rimodellamento del citoscheletro, l’attivazione piastrinica e la stabilizzazione del trombo. L’alterazione di GP9 compromette l’espressione di superficie e la funzione del complesso GPIb-IX-V, modificando la dinamica di adesione piastrinica e le vie di attivazione a valle. Difetti genetici di GP9 sono associati a macrotrombocitopenia ereditaria e a fenotipi emorragici compatibili con la sindrome di Bernard–Soulier, rendendo GP9 un locus utile per studiare la biogenesi piastrinica e la segnalazione dell’adesione.
CD42a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GP9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GP9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GP9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GP9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.