CD39L4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410720-ACT

Das humane Gen **ENTPD5** codiert **CD39L4**, eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Ectonukleosid-Triphosphat-Diphosphohydrolase, die **UDP** und **GDP** zu Monophosphaten hydrolysiert und damit die Homöostase von Nukleotidzuckern sowie die Qualitätskontrolle von Glykoproteinen unterstützt. Durch die Aufrechterhaltung des **UDP-Glukose**-abhängigen **Calnexin/Calreticulin**-Faltungszyklus beeinflusst CD39L4 die Proteinprozessierung im ER, die **N-Glykosylierung** und Proteostase-Programme, die mit Sekretion und der Reifung von Membranrezeptoren verknüpft sind. Die ENTPD5-Aktivität überschneidet sich mit ER-Stress-Signalwegen und metabolischer Umprogrammierung, indem sie den Bedarf an Proteinfaltung und den glykanabhängigen Transport beeinflusst. Eine dysregulierte ENTPD5-Expression wurde in der Krebsbiologie mit veränderten Glykosylierungsphänotypen und proliferationsbezogenen Signalwegen in Verbindung gebracht, wodurch das Gen für Studien zur ER-Homöostase und zu onkogenen Signalkaskaden relevant ist.

CD39L4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ENTPD5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD39L4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ENTPD5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ENTPD5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD39L4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ENTPD5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD39L4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD39L4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ENTPD5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.