CD38 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419548-ACT

Il gene murino Cd38 codifica CD38, un ectoenzima multifunzionale che catalizza il metabolismo del NAD⁺ generando secondi messaggeri come l’ADP-ribosio ciclico e il NAADP, regolando così la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare. L’attività di CD38 influenza l’attivazione, la differenziazione e l’adesione delle cellule immunitarie e contribuisce all’omeostasi metabolica e redox attraverso la modulazione della segnalazione dipendente dal NAD⁺. Nei compartimenti ematopoietico e stromale, le vie associate a CD38 intersecano la segnalazione purinergica, programmi trascrizionali Ca²⁺-dipendenti e reti di citochine infiammatorie. Un’espressione alterata di CD38 o variazioni della sua funzione enzimatica sono ampiamente utilizzate come correlato molecolare di disregolazione immunitaria, rimodellamento metabolico e cambiamenti legati all’età nel turnover del NAD⁺ nei modelli murini di malattia.

CD38 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd38 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD38 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd38 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd38, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD38. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd38 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD38 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD38 nelle cellule tumorali con espressione di Cd38 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.