CD362/SDC2/Syndecan-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401392-ACT

SDC2 codifica la sindecano-2 (CD362), un proteoglicano transmembrana a eparan solfato che organizza la matrice pericellulare e funge da co-recettore per fattori di crescita, chemochine e ligandi della matrice extracellulare. Coordinando le interazioni con integrine, chinasi della famiglia Src e la segnalazione delle GTPasi Rho, la sindecano-2 modula la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione cellulare, con effetti a valle su vie quali FAK/ERK e Wnt/β-catenina. SDC2 contribuisce anche alla comunicazione cellula-cellula e all’attività delle proteasi tramite lo shedding dell’ectodominio, influenzando microambienti angiogenici e infiammatori. Un’espressione deregolata di SDC2 è stata associata all’invasione delle cellule tumorali, al rimodellamento legato alla fibrosi e ad alterazioni della segnalazione stromale, supportandone l’uso come nodo meccanicistico in studi di segnalazione rilevanti per la patologia.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SDC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SDC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SDC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD362/SDC2/Syndecan-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SDC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD362/SDC2/Syndecan-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD362/SDC2/Syndecan-2 nelle cellule tumorali con espressione di SDC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.