CD36 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400233-ACT

Il CD36 umano codifica un recettore scavenger multifunzionale che media l’assorbimento di acidi grassi a catena lunga e di lipoproteine ossidate, coordinando la gestione dei lipidi con lo stato metabolico cellulare. CD36 partecipa ai programmi di trasporto e stoccaggio dei lipidi e si integra con la segnalazione infiammatoria, inclusi processi legati all’attivazione dei macrofagi e alla formazione di cellule schiumose. Attraverso i suoi ruoli nella biologia delle cellule endoteliali, degli adipociti e delle cellule immunitarie, CD36 è spesso studiato nei percorsi alla base dell’aterosclerosi, della disfunzione metabolica e dell’infiammazione cronica. Un’alterata attività di CD36 è stata inoltre indagata nel metabolismo delle cellule tumorali e nel microambiente tumorale, dove l’utilizzo dei lipidi può influenzare la crescita e i fenotipi immunitari.

CD36 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD36 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD36 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD36 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD36, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD36. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD36 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD36 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD36 nelle cellule tumorali con espressione di CD36 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.