CD33 Plasmide Double Nickase (h): sc-401011-NIC

CD33 (Siglec-3) è una lectina di tipo immunoglobulinico che lega l’acido sialico, espressa prevalentemente sulle cellule della linea mieloide, dove funge da recettore inibitorio che attenua l’attivazione immunitaria. Attraverso la segnalazione mediata dal motivo inibitorio basato su tirosina dei recettori immunitari (ITIM) e il reclutamento di fosfatasi come SHP-1/2, CD33 modula le vie a valle che controllano la produzione di citochine, la fagocitosi e le soglie di attivazione cellulare. CD33 partecipa alla regolazione dell’omeostasi dell’immunità innata e delle risposte microgliali, collegando il riconoscimento dei glicani a programmi di segnalazione inibitoria. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CD33 sono state implicate in neoplasie mieloidi e in processi neuroinfiammatori, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione immunitaria e sui fenotipi mieloidi associati alla malattia.

CD33 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD33 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD33. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD33. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD33 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.