CD300E Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415572-ACT

CD300E codifica un immunorecettore della famiglia CD300 espresso prevalentemente nelle cellule della linea mieloide, dove contribuisce a regolare l’attivazione dell’immunità innata. L’ingaggio di CD300E influenza reti di segnalazione che coordinano la produzione di citochine infiammatorie, l’attivazione dei fagociti e la funzione delle cellule presentanti l’antigene, interfacciandosi con vie associate a ITAM e con cascate di chinasi a valle che modellano le risposte cellulari a patogeni e danno tissutale. Modulando gli stati di attivazione mieloide, CD300E è rilevante per lo studio della disregolazione immunitaria nell’infiammazione cronica, nell’autoimmunità e nel rimodellamento mieloide associato ai tumori. Le dinamiche di espressione e l’output di segnalazione ne fanno un utile strumento molecolare per analizzare il controllo mediato da recettori di monociti, macrofagi e cellule dendritiche.

CD300E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD300E senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD300E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD300E nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD300E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD300E. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD300E nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD300E nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD300E nelle cellule tumorali con espressione di CD300E silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.