CD274/PD-L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425636-ACT

Cd274 codifica CD274/PD-L1, uma proteína imunorreguladora transmembrana do tipo I que se liga ao PD-1 (Pdcd1) e modula a sinalização do receptor de células T para restringir a função efetora, a produção de citocinas e a atividade citotóxica. Em camundongos, a expressão de PD-L1 é induzida por sinais inflamatórios, como IFN-γ, por meio da sinalização JAK/STAT e é moldada por vias que incluem NF-κB e PI3K–AKT, integrando respostas imunes inatas e adaptativas. O PD-L1 contribui para a tolerância periférica e a homeostase imune ao limitar a ativação excessiva, enquanto a expressão alterada em tumores e tecidos com inflamação crônica está associada à evasão imune e a estados disfuncionais de células T. Essas características fazem de Cd274 um nó central para estudar a biologia de checkpoints imunológicos, contextos de apresentação de antígenos e a comunicação cruzada entre compartimentos estromal, mieloide e linfoide.

CD274/PD-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd274 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD274/PD-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd274 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd274, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD274/PD-L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd274 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD274/PD-L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD274/PD-L1 em células tumorais com expressão de Cd274 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.