Plásmido CRISPR de Activación (m) CD223: sc-421371-ACT

Lag3 codifica CD223, un receptor inhibidor de punto de control inmunitario expresado en células T activadas, células T reguladoras, células NK y subpoblaciones de células dendríticas en el ratón. La interacción de CD223 modula la intensidad de la señalización del TCR y determina la diferenciación efectora al atenuar vías de activación proximales, contribuyendo a la tolerancia periférica y al control de las respuestas inflamatorias. En microambientes inmunitarios con exposición persistente al antígeno, CD223 se asocia con programas transcripcionales vinculados a la disfunción de las células T y a una producción alterada de citocinas. Debido a su papel en la señalización de puntos de control y en la homeostasis inmunitaria, Lag3 se estudia con frecuencia en modelos de inflamación crónica, infección e inmunología tumoral para dilucidar mecanismos de regulación inmunitaria.

CD223 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lag3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD223 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lag3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lag3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD223. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lag3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD223 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD223 en células tumorales con expresión de Lag3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.