CD206/Mannose Receptor/MMR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421707-LAC

Mrc1 codifica per CD206/Recettore del mannosio (MMR), un recettore scavenger di tipo lectina C arricchito in macrofagi e cellule dendritiche, che lega glicani contenenti mannosio, fucosio e N-acetilglucosammina presenti su patogeni e glicoproteine endogene. CD206 media endocitosi e fagocitosi dipendenti dalla clatrina, sostenendo la captazione e il processamento dell’antigene, il traffico lisosomiale e il riconoscimento guidato dai glicani nell’immunità innata. È ampiamente utilizzato come marcatore della polarizzazione dei macrofagi alternativamente attivati (simili a M2) e partecipa a vie che modellano il rimodellamento tissutale, la riparazione delle ferite e programmi citochinici immunoregolatori. Un’espressione alterata di CD206 è implicata in infiammazione cronica, fibrosi, disfunzione metabolica e biologia dei macrofagi associati al tumore, rendendo Mrc1 rilevante per studi sulla regolazione del microambiente e sulle interazioni ospite–patogeno in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale CD206/Mannose Receptor/MMR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mrc1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD206/Mannose Receptor/MMR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mrc1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD206/Mannose Receptor/MMR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mrc1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.